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标题:
幼兔兔出血症疫苗体液免疫反应研究
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作者:
薛家宾
时间:
2008-1-31 16:24
标题:
幼兔兔出血症疫苗体液免疫反应研究
幼兔兔出血症疫苗体液免疫反应研究
4 A H0 K6 t% _$ \2 R
杨龙圣，薛家宾，徐为中，胡元亮
* `6 T- [" i! j0 r, K
: m1 s4 K. d% e6 l% g4 S
兔病毒性出血症（rabbit hemorrhagic disease，RHD）是由兔出血症病毒（RHD virus，RHDV）引起的家兔的一种急性、高度接触性传染病,常呈爆发性流行，发病率和死亡率极高，给养兔业造成极大的经济损失[1]。兔出血症病毒（RHDV）对青年、成年兔致病高，对二月龄以下幼兔一般不感染发病[1～3]。近年来的幼兔发生兔出血症逐渐增多[4～6]，一些学者认为初免日龄在45日龄左右为宜，最好是用兔瘟单苗加倍免疫注射，60日龄左右再加强免疫一次[7]。而一部分养殖单位在仔兔断奶前后（30-35日龄）就免疫兔瘟苗，仅用单倍剂量，不再加强免疫，有时会发生免疫注射兔瘟苗后仍然发生兔瘟病[8][9]。为探明免疫注射后仍然发病的根源，进行了本试验研究。旨在通过免疫日龄及剂量与抗体产生之间的关系研究，明确幼兔兔瘟苗免疫的客观规律。
. E' w/ z4 a$ D* ^; }3 E
1 材料与方法
! T% B5 s5 f& e2 b$ v9 p u2 G8 w
1.1 材料
2 e) v% o O& ^8 K. I/ F
新西兰兔，35、40、45日龄。兔病毒性出血症组织灭活疫苗（批号20041201），阳性血清，阴性血清，兔出血症病毒（RHDV，皖阜株）均由江苏省农业科学院兽医研究所提供；人“O”型红细胞，由南京军区总医院提供。
* q% T, Z- ]% ^6 P& I. u& Y2 N
TGL-16G台式高速离心机，由上海医用分析仪器厂生产；WMK-2型37℃恒温箱，南京试验仪器厂；100µl移液枪，eppendorf公司生产；50孔U型血凝板。
) _1 w [4 W, \( B/ G
1.2 动物分组与血样处理
/ k- j; y' b/ D( w" Z; d
分别取35、40、45日龄幼兔各30只，每个日龄组分不免疫、免疫剂量1、免疫剂量2、免疫剂量3、免疫剂量4五个处理组，共15组，每个剂量组6只幼兔，颈部皮下注射兔瘟疫苗。注射疫苗后，每周1次耳静脉或心脏采血。血液置37℃温箱内1小时，10000rpm/min离心10min，吸取上清。血清置56℃水浴锅内30min后，用于测定抗体效价。
6 S9 v/ t$ H. S$ L
1.3 兔瘟抗体效价的测定
" x) n' o" g1 {$ c
微量血凝抑制试验（HI）方法检测兔瘟抗体[10]。取50µl待检血清用等量生理盐水进行倍比稀释6个梯度，分别在每孔加入等量的4单位血凝病毒，37℃感作30min，加入等量的1％人“O”型红细胞，4℃感作30min,观察结果。同时设阳性血清和阴性血清作为对照。结果以平均数±标准差表示，用SPSS软件从剂量和日龄两个角度作统计分析。
f2 ^9 H; g. j( Z/ u& I4 x& h
2 结果与分析
' ]7 _! L$ B( w6 T! r& d8 {
2.1 35日龄不同剂量组的抗体效价
8 U: y! }# P! e5 c# Z9 _5 _
35日龄组幼兔兔瘟疫苗免疫剂量2、3、4后，其抗体产生速度较剂量1组快，剂量2、3、4组抗体效价一直显著高于剂量1组，剂量2、3、4组抗体效价峰值5.83显著高于剂量1组峰值3.25，有效抗体维持时间(>7周)大于剂量1组的2周。35日龄组幼兔剂量2、3、4组之间抗体产生速度、峰值、维持时间均无显著差异（表1）
; C! S# V' @8 @8 a
表1 35日龄幼兔免疫不同剂量兔瘟疫苗后抗体效价的变化
4 e. A( Z9 h r0 W
Table 1. Diversification of the antibody of the 35 day-old rabbit immuned with different doses of vaccine
% W. J) v, Y0 R) v; a9 i0 M/ p
免疫
) _. ?0 k5 F2 ^" U4 H
剂量 免疫前 免疫后
* \$ E8 a; n" z
1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周
6 ]3 U. T# D6 Z: F( O* a
0 2.50±0.41 1.25±0.95b 1.00±0.82c 0.75±0.96c 0.25±0.50d 0.25±0.50d 0.00±0.00d 0.00±0.00c
1 n4 _/ K3 S3 x2 X3 ]6 u i2 @
1 2.50±0.41 3.25±0.50a 3.00±0.82b 2.38±0.48b 2.00±0.00c 1.00±0.00c 0.75±0.50c 0.00±0.00c
% J/ o% v9 T0 a) {. V
2 2.00±1.00 4.00±0.00a 4.66±0.58a 5.50±0.71a 5.67±0.58a 5.00±0.71b 4.50±0.73ab 4.50±0.53a
- y c' |* N+ O
3 2.00±1.00 4.00±1.00a 4.33±0.58a 5.33±0.58a 5.00±0.00b 5.25±0.35ab 4.25±0.23b 4.00±0.34b
: S/ P) F& d1 V t3 e; z
4 2.33±0.58 4.00±1.00a 4.33±0.58a 5.33±0.58a 5.83±0.29a 5.50±0.00a 4.75±0.56a 4.33±0.26ab
' X. }1 q5 D3 W: F7 l( }) \
注：同列数据标有不同字母者表示差异显著（P<0.05）。以下数据同。
2 f! F$ W: g$ u) X% ]
Note: data with different superscripts withine a column show different significantly(p<0.05). The same as follows.
5 N, w7 G' W6 u& h
5 W, X! v! Q: A' P
2.2 40日龄不同剂量组的抗体效价
* m3 y3 j2 a# S' ? C3 a, b- R
40日龄组幼兔兔瘟疫苗免疫剂量2、3、4组后，其抗体产生速度较剂量1组快，免疫后第2周，各剂量组抗体效价均到达峰值，且各剂量组抗体效价峰值没有显著差异。免疫后第4周，剂量1组抗体效价显著下降，剂量2、3、4组抗体效价显著高于剂量1组抗体效价，剂量2、3、4组有效抗体维持时间大于剂量1组有效抗体维持时间（表2）
" t* C3 Z/ W4 E$ h$ e/ p
表2 40日龄幼兔免疫不同剂量兔瘟疫苗后抗体效价的变化
! r+ \/ ]7 v- R0 J: C6 J
Table 2 .Diversification of the antibody of the 40 day-old rabbit immuned with different doses of vaccine
1 r. S9 w- f) i$ Y8 e
免疫剂量 免疫前 免疫后
/ G3 g6 d' N7 p6 B1 E" S3 \
1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周
" G } o5 V8 u( M
0 1.25±0.58 1.00±0.82b 0.75±0.96b 0.25±0.50b 0.20±0.50c 0.00±0.00c 0.00±0.00c 0.00±0.00c
* P. f2 Y8 {, l& e D D& D) Q: J9 ^
1 1.25±0.96 3.00±0.82a 5.75±1.71a 5.00±1.83a 2.75±0.96b 3.00±0.82b 2.13±0.50b 1.83±0.58b
( d2 u1 _$ b2 D6 y6 h. o- k8 g
2 1.33±0.58 4.33±1.15a 5.83±0.29a 5.17±0.29a 5.33±0.58a 5.33±0.58a 5.00±0.00a 4.50±0.00a
$ x. d' X4 ^8 m( H4 K
3 1.27±0.58 4.00±1.00a 5.50±0.50a 5.17±0.29a 5.00±1.00a 5.00±0.58a 5.00±0.29a 4.50±0.00a
6 h: E J6 s& @* t4 I
4 1.33±0.58 4.33±0.58a 5.83±0.29a 5.17±0.35a 5.33±0.58a 5.00±0.00a 5.00±0.35a 4.50±0.29a
" b1 }& |: p- |5 J3 o9 M Y; B& t
( D5 q1 r! Z5 O% d3 H4 P
2.3 45日龄不同剂量组的抗体效价
3 ^# k; j( Q; D# A5 V
45日龄组幼兔兔瘟疫苗免疫剂量2、3、4组后，其抗体产生速度较剂量1组快，免疫后第2周，各剂量组抗体效价均到达峰值，且各剂量组抗体效价峰值没有显著差异。免疫后第4周，剂量1组抗体效价显著下降，免疫后第5周，2～4单位剂量剂量组抗体效价显著高于剂量1组抗体效价，2～4单位剂量剂量组有效抗体维持时间大于剂量1组有效抗体维持时间（表3）。
! n- I8 L) Z+ Y0 D7 g; ]4 c
表3 45日龄幼兔免疫不同剂量兔瘟疫苗后抗体效价的变化
4 ]4 x8 w% P M9 F# \
Table 3 .Diversification of the antibody of the 45 day-old rabbit immuned with different doses of vaccine
6 K( R( w2 \& e v
免疫剂量 免疫前 免疫后
; e( _3 V1 Z- j3 `* w
1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周
' A. n Q* w* P0 l4 @8 X
0 1.00±0.57ab 0.80±0.96b 0.35±0.50b 0.25±0.50c 0.00±0.00c 0.00±0.00c 0.00±0.00c 0.00±0.00c
9 \6 D0 w( s6 Q& h
1 2.00±0.82a 3.25±1.26a 5.25±0.96a 5.50±1.29a 3.75±0.96b 3.25±1.26b 2.38±1.79b 2.00±1.41b
/ I! z8 [+ H6 h6 ]* x8 l- N, d
2 1.00±0.00ab 4.00±1.00a 5.17±0.58a 4.83±0.29b 5.16±0.76ab 5.50±0.45a 5.50±0.00a 4.75±0.59a
* ^4 x& W% L$ V2 E% y
3 1.00±1.00ab 4.47±0.50a 5.25±1.06a 5.50±0.00a 5.75±0.35a 5.25±1.06a 5.00±0.50a 4.50±0.56a
) Y% W; h, H9 d% D/ c7 V3 r
4 0.33±0.58b 4.33±0.58a 5.50±0.00a 5.50±0.00a 5.25±0.35ab 5.25±0.35a 5.00±0.50a 4.50±0.36a
5 e2 C: f5 d# H% p
% S5 b' [; D: s h
2.4 35、40、45日龄组免疫剂量1疫苗后的抗体效价
" l( H2 |( ?3 V! L' L
注射剂量1疫苗时，免疫后第1周，各日龄组之间抗体效价没有显著差异，免疫后2～3周，3个日龄组抗体效价均上升至峰值，40、45日龄组抗体效价均显著高于35日龄组，40、45日龄组之间抗体效价没有显著差异，35日龄组有效抗体维持时间为2周，40～45日龄有效抗体维持时间为4周（表4）
( l& y- l9 P1 f
表4 不同日龄幼兔免疫剂量1后抗体变化比较
( \* [ u9 u( ^% o8 T0 C& l. [
Table 4 The comparasion of the antibody of different days-old rabbits immuned with 1-unit dose of vaccine
+ v9 }# ]" B K, C8 H
免疫日龄 免疫前 免疫后
" Y4 n8 u1 j5 Z. @! l
1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周
. k7 L2 `: _$ h% Y2 B" \
35日龄 2.50±0.41a 3.25±0.50 3.00±0.82b 2.38±0.48b 2.00±0.00b 1.00±0.00b 0.75±0.50b 0.00±0.00b
/ i3 E7 |2 O. A. A) k5 h: s
40日龄 1.25±0.96b 3.00±0.82 5.75±1.71a 5.00±1.83a 2.75±0.96 ab 3.00±0.82a 2.13±0.50a 1.83±0.58a
0 |8 b" `4 I) W, A. {! u3 N8 m
45日龄 2.00±0.82ab 3.25±1.26 5.25±0.96a 5.50±1.29a 3.75±0.96a 3.25±1.26a 2.38±1.79a 2.00±1.41a
, e9 i. v5 b3 k* Y# m+ N
注：同列数据标有不同字母者表示差异显著（P<0.05）。以下数据同。
* W+ d" ]) ?+ L" U- U
Note: data with different superscripts withine a column show different significantly(p<0.05). The same ac follows.
; h5 v2 j! B* M# t
2 @# c! d4 f1 z$ F5 ^) h+ L' G
2.5 35、40、45日龄组免疫剂量2疫苗后的抗体效价
- |3 u" ~# E, q; B- @
注射剂量2兔出血症疫苗之后，各日龄组均在免疫后1周抗体效价升至保护性效价，各日龄组抗体效价峰值之间没有显著差异，40、45日龄组抗体效价峰值到达的时间为2周，35日龄组抗体效价峰值到达的时间为4周，各组有效抗体维持时间没有显著差异（表5）
/ ]* l3 r Y$ f, p
表5 不同日龄幼兔免疫剂量2后抗体变化比较
8 a* ]0 v% O* ^6 m# h
Table 5 The comparasion of the antibody of different days-old rabbits immuned with 2-unit dose of vaccine
4 p9 J# \* v5 e. J7 u8 _: w# X
免疫日龄 免疫前 免疫后
4 V3 `. h5 |% |* _
1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周
5 o4 R% B* M* ^ N! `, B9 m
35日龄 2.00±1.00 4.00±0.00 4.66±0.58b 5.50±0.71a 5.67±0.58a 5.00±0.71 4.50±0.73b 4.50±0.53
( @1 t' u4 a& \! n% D% k4 z
40日龄 1.33±0.58 4.33±1.15 5.83±0.29a 5.17±0.29ab 5.33±0.58ab 5.33±0.00 5.00±0.00ab 4.50±0.00
% S3 @6 F- p" w: k
45日龄 1.00±0.00 4.00±1.00 5.17±0.58ab 4.83±0.29b 5.16±0.76b 5.50±0.00 5.50±0.00a 4.75±0.59
2 q7 K5 R6 l+ z* p
9 k6 j6 q; C' f% ^
2.6 35、40、45日龄组免疫剂量3、4疫苗后的抗体效价
8 h2 |% i, {$ E% a. s) a$ |1 o
用剂量3、4注射兔出血症疫苗后，各日龄组均在免疫后1周抗体效价升至保护性效价，各日龄组抗体效价峰值之间没有显著差异，40、45日龄组抗体效价峰值到达的时间为2周，35日龄组抗体效价峰值到达的时间为4周，各组有效抗体维持时间没有显著差异（表6、7）。
4 g3 U% `+ p ?, }+ D
表6 不同日龄幼兔免疫剂量3后抗体变化比较
4 h' i. H' ?7 N0 [: @- Y7 }# s' R- G
Table 6 The comparasion of the antibody of different days-old rabbits immuned with 3-unit dose of vaccine
* s6 T: W1 U* x0 M9 M% y& I+ U
免疫
5 x- Z# k5 [/ z! _6 }8 e
日龄 免疫前 免疫后
: m( {' p" p! ?% E
1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周
: k$ `! d2 n. V0 U8 P# G
35日龄 2.00±1.00 4.00±1.00 4.33±0.58 5.33±0.58 5.00±0.00 5.25±0.35 4.25±0.23b 4.00±0.34
* A; \9 P/ E0 F( @
40日龄 0.67±0.58 4.00±1.00 5.50±0.50 5.17±0.29 5.00±1.00 5.00±0.00 5.00±0.29a 4.50±0.00
5 w' n. ~/ Q2 N. C4 j* Y
45日龄 1.00±1.00 4.47±0.50 5.25±1.06 5.50±0.00 5.75±0.35 5.25±1.06 5.00±0.50a 4.50±0.56
& Z% e" P! |( |
+ E- X/ N% x: R ^
表7 不同日龄幼兔免疫4单位剂量后抗体变化比较
6 Y5 x( _- g; L) ?% W7 D. r+ S/ H
Table 7 The comparasion of the antibody of different days-old rabbits immuned with 4-unit dose of vaccine
, T5 A0 h0 H5 q: q W, A
免疫
/ C7 o& E$ I4 v4 p6 \; R- {4 N9 _
日龄 免疫前 免疫后
4 |3 b4 o8 X1 ~* Y2 x+ B
1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周
" u' l8 T7 _4 }/ L+ i$ R( `, r
35日龄 2.33±0.58a 4.00±1.00 4.33±0.58b 5.33±0.58 5.83±0.29 5.50±0.00 4.75±0.56 4.33±0.26
- q K% y; g% f6 N
40日龄 1.33±0.58ab 4.33±0.58 5.83±0.29a 5.17±0.35 5.33±0.58 5.00±0.00 5.00±0.35 4.50±0.29
" R6 P1 @: u$ O) N: q
45日龄 0.33±0.58b 4.33±0.58 5.50±0.29a 5.50±0.00 5.25±0.35 5.25±0.35 5.00±0.50 4.50±0.36
1 b5 Z9 m9 l, {1 C3 W
8 Y, z; ?+ Z2 v, N0 u
3 小结与讨论
9 b+ Z. n+ w" L% n9 E! f
3.1 相同日龄免疫剂量与抗体产生之间的关系
: B0 u% p9 k# F. T, T4 ^
35日龄的剂量2、3、4组的抗体峰值、有效抗体维持时间、抗体产生速度均显著大于剂量1组，但是剂量2、3、4组之间的抗体峰值、有效抗体维持时间没有显著差异，抗体产生速度与40、45日龄的剂量2、3、4组均为1周，抗体峰值的产生较40、45日龄的剂量2、3、4组仅慢1周。40日龄的剂量1、2、3、4组之间的抗体峰值无显著差异，剂量2、3、4组的抗体产生速度、有效抗体维持时间显著高于剂量1组。45日龄的剂量1、2、3、4组之间的抗体峰值无显著差异，剂量2、3、4组的抗体产生速度、有效抗体维持时间显著高于剂量1组。
. P' t m& j' C; s7 A- e
3.2 同一剂量的不同免疫日龄与抗体产生之间的关系
. z* _0 b0 p7 i& e
免疫结果表明，不同日龄在免疫剂量1时，免疫日龄与血清抗体峰值和有效保护时间呈正相关。35日龄的抗体上升速度、有效抗体维持时间、抗体峰值均显著小于其它日龄组。免疫剂量2～4时，35日龄的抗体上升速度、有效抗体维持时间、抗体峰值与其它日龄组之间无显著差异。说明加大剂量之后，可以解决当前存在的免疫程序问题。
6 u8 m; L! A# x7 [7 s
目前，国内幼兔免疫机理方面的研究开展很少，人们对其免疫规律以及机理还不是十分清楚。本研究结果证明了兔出血症免疫程序中确实存在一些问题，同时提出了一些建议以供参考，并为进一步的深层次研究提供了实践依据。
; n7 j0 e4 S% J; }
4 e: ^8 ?( d/ d+ Q4 `
[
本帖最后由 薛家宾 于 2008-1-31 16:25 编辑
]
作者:
王高
时间:
2008-1-31 16:52
好
作者:
qiuhuangang
时间:
2008-2-2 00:50
谢谢教授........
作者:
王高
时间:
2008-2-2 10:48
从薛老师得到的提示应该是35日龄的小日龄可以注射，加倍注射效果好。但是我们实际当中的商品肉兔都是28日龄断奶，到35日龄也隔了好几天了。我想问实际当中刚刚断奶时可否注射兔瘟疫苗？请薛老师看看行不行。
作者:
1985su
时间:
2008-2-2 14:04
兔瘟/波氏。魏氏苗的效果确实。大肠杆菌根本就多余，巴氏还有一定的用途
作者:
薛家宾
时间:
2008-2-3 08:45
标题:
回复 4楼 的帖子
建议再看一下另一篇文章-免疫日龄对兔病毒性出血症抗体水平和保护率的影响.
9 k5 w# ~9 N8 F: c/ W
. q* ~) ]3 }* g. b( R
[
本帖最后由 薛家宾 于 2008-2-3 08:46 编辑
]
作者:
张连春
时间:
2008-2-3 20:45
:vic
tory:
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好 tory: