采精是对家兔人工授精的首要一环。下面就手握假***采精和授精方法介绍如下:
1.1 假***的制作:用直径5cm左右,长度8cm左右的硬塑料管一支,把两端锉光,内装与塑管内径相仿的软海绵一块,将海绵沿直轴方向打一小孔,孔径为0.5cm,孔口呈伞形。集精装可用大号避孕套代替。
1.2 采精前的器械准备:将洗净、消毒过的避孕套松开,装入假***内胎中,使开口的一端翻转,固定在外壳边缘,有囊的一端露出内胎的另一端约1cm,注入50~60℃的温水中,使海绵吸收,用温度计蘸取生理盐水或液石蜡,插入假***内4cm处测温。当降至43℃左右时即可采精。测温时要注意外界条件,如气温低、降温快,内胎温度高些;反之可低些。对公兔采精每ld仅采一次,如果两次,第二次的精子则不成熟。
1.3 采精:采精的地点可在公兔笼内,左手拿一只母兔诱情,待公兔"爬背"时,右手呈43°角持假***放在母兔后腿中间,待公兔射精后,立即将假***孔口朝上,以防精液流失。
1.4 假***泣度对采精效果有直接影响。公兔××对温度极为敏感,低于40℃不易引起射精;过高温度采精会养成嗜高温的坏习惯,对精液品质也有影响。由于母兔的正常体温在39~4O.5℃之间,因此,假***温度以40~42℃之间为宜。
2 精液的检查与稀释
2.1 精液的检查
2.1.1 外观检查:正常公兔的精液呈淡乳白色,具有特殊的腥味,也有少数兔子的精液不正常,混入尿液的色黄有臭味;生殖器有炎症出血的带红色;清水样的为无精子。兔子的精量很少,一般在0.2~2mL之间,平均为0.8mL。在实际应用中,一般以目测估计。
2.1.2 显微镜检查:主要是精子密度的检查和活力的评定。精子密度是指单位容积内所含有的精子数目。精子数的计算,直接关系到授精剂量中含有活精子数。在实践中常用目测法。目测法是根据精子在视野中分布的概况,即精子与精子之间的距离评定为"密"、"中"、"稀"三种等级。这种方法虽是主观评定,但简便易行,实际工作中多采用此法。家兔的精子密度随季节变化也十分明显。
精子活力是指精液中直线前进运动精子所占百分率。标记"0.9""0.8""0.7……",分别代表90%、80%、70%……的精子具有前进运动力。这是一种主观评定法,有经验的技术员估计的结果往往很接近实际数。兔子的精子活力应在0.5级以上方可用于授精。如在0.5级以下则受精率很低。不同季节的精子活力差异也十分明显,9至10月平均活力仅0.15级;12月至次年2月平均活力0.51级;3至5月平均活力0.61级。
2.2 精液的稀释
精液稀释的目的首先是为了扩大精液量,增加输精母兔只数,同时也是为了延长精子存活时间。在配制稀释保存液时应当考虑下列因素。
2.2.1 营养成分:精子在代谢过程中主要是单方面的分解作用。成熟的精子不能通过同化作用将外界物质变成本身的成分。因此为了补充精子的能量消耗,只有用最简单的营养物质,目前常用的是:果糖、山梨醇、甘油磷酸胆碱(GPC)和磷脂。
2.2.2 保护成分。缓冲物质――为了保持精液适当的pH值,常用柠檬酸钠、酒石酸钾钠、磷酸二氢钾和磷酸氢二钠等。防冷击保护剂――常用的有卵磷脂、卵黄、蛋白陈、乳类。制菌物质――常用青霉素(每lmL稀释液加入500~1000单位)、链霉素(每lmL稀释液加人500~1000μg)。
家兔精子的理想稀释液广泛应用的是0.9%的氯化钠或5%的葡萄糖溶液,稀释倍数一般为9倍。稀释时稀释液的温度应与精液等温。稀释液注大集精瓶(袋)的速度不能过快。注入后再用玻璃棒轻轻搅动,使其均匀混合。稀释后的精液应作一次显微镜检查,发现活力不强或死亡过多的精子则不能用作输精。
3 输精方法
输精就是将精液注入母兔的生殖道内,是人工授精的最后一环。
3.1 输精器:可用玻璃输精器,前端长l0cm左右的空心小玻管与2mL注射器相连,也可用实验用滴管代替,每输精一次应更换一支无菌输精器。
3.2 输耕母兔的选择:应选择健康无病,处于发情期的母兔进行授精,这对提高受胎率有很大益处。
3.3 刺激母兔排卵:母兔发情后,如无交配或其它蕴含物刺激则不会排卵。人工授精缺乏交配的刺激性。然而对母兔注射促排卵素3号却有较好的促排卵效果,每只兔注射0.5μg,母兔输精前后注射都同样有效。
3.4 输精:由助手抓住母兔的背部,使母兔臀部略朝上,输精员持输精器(如一人操作可一手抓兔,一手持输精器)。取经过稀释的精液O.5mL(约含精子1000万个以上)慢慢插入母兔***内约6~7cm处即可输精。输精器及精液必须加温至与兔子体温相接近,输精前可放在35℃的温水中保温。插入时应轻轻向前上方旋动,要边旋边进,切不可硬插,以免损伤生殖道。插入后可来回轻轻抽动和转动几次,有助于刺激子宫颈。抽出输精器时也应慢慢地边转动边抽出,以防精液随输精器溢出。抽出输精器后,即由助手拍打一下兔子的臀部,使母兔受惊,以便精子吸人。
每次输稀释过的精液需0.8mL,一只种公兔的精子稀释后可输入10只母兔。整个人工授精过程要求动作准确,无菌操作。
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