东兔养兔论坛

标题: 幼兔兔出血症疫苗体液免疫反应研究 [打印本页]
作者: 薛家宾    时间: 2008-1-31 16:24
标题: 幼兔兔出血症疫苗体液免疫反应研究
幼兔兔出血症疫苗体液免疫反应研究
1 z; F; B) B6 g4 U' y1 k杨龙圣，薛家宾，徐为中，胡元亮) y* ^4 Z% `  Y: {6 I" p% w

+ J+ V+ E& i5 `) A0 z1 ?6 |  A兔病毒性出血症（rabbit hemorrhagic disease，RHD）是由兔出血症病毒（RHD virus，RHDV）引起的家兔的一种急性、高度接触性传染病,常呈爆发性流行，发病率和死亡率极高，给养兔业造成极大的经济损失[1]。兔出血症病毒（RHDV）对青年、成年兔致病高，对二月龄以下幼兔一般不感染发病[1～3]。近年来的幼兔发生兔出血症逐渐增多[4～6]，一些学者认为初免日龄在45日龄左右为宜，最好是用兔瘟单苗加倍免疫注射，60日龄左右再加强免疫一次[7]。而一部分养殖单位在仔兔断奶前后（30-35日龄）就免疫兔瘟苗，仅用单倍剂量，不再加强免疫，有时会发生免疫注射兔瘟苗后仍然发生兔瘟病[8][9]。为探明免疫注射后仍然发病的根源，进行了本试验研究。旨在通过免疫日龄及剂量与抗体产生之间的关系研究，明确幼兔兔瘟苗免疫的客观规律。
% A; s: T9 C5 ^0 H1 材料与方法
5 W6 g3 _, B$ }4 g& C1.1 材料
# O: V9 i' u9 u4 p2 F7 m$ ]新西兰兔，35、40、45日龄。兔病毒性出血症组织灭活疫苗（批号20041201），阳性血清，阴性血清，兔出血症病毒（RHDV，皖阜株）均由江苏省农业科学院兽医研究所提供；人“O”型红细胞，由南京军区总医院提供。2 ~( M8 S- u) c* W# M* `: h6 a0 L: I
TGL-16G台式高速离心机，由上海医用分析仪器厂生产；WMK-2型37℃恒温箱，南京试验仪器厂；100µl移液枪，eppendorf公司生产；50孔U型血凝板。
$ A, h! A3 f* H1 U( }3 n# T1.2 动物分组与血样处理
7 V5 k8 U+ S: \; N" S6 W分别取35、40、45日龄幼兔各30只，每个日龄组分不免疫、免疫剂量1、免疫剂量2、免疫剂量3、免疫剂量4五个处理组，共15组，每个剂量组6只幼兔，颈部皮下注射兔瘟疫苗。注射疫苗后，每周1次耳静脉或心脏采血。血液置37℃温箱内1小时，10000rpm/min离心10min，吸取上清。血清置56℃水浴锅内30min后，用于测定抗体效价。* [9 c( v0 ]& R
1.3 兔瘟抗体效价的测定) {6 Z2 t1 {* o& @1 W; T
微量血凝抑制试验（HI）方法检测兔瘟抗体[10]。取50µl待检血清用等量生理盐水进行倍比稀释6个梯度，分别在每孔加入等量的4单位血凝病毒，37℃感作30min，加入等量的1％人“O”型红细胞，4℃感作30min,观察结果。同时设阳性血清和阴性血清作为对照。结果以平均数±标准差表示，用SPSS软件从剂量和日龄两个角度作统计分析。
) _' |$ c( I1 ]9 i( H2 结果与分析5 ]& e$ Y9 O, M- K3 e! o( a
2.1 35日龄不同剂量组的抗体效价
$ |8 D4 R/ |% [/ F) P35日龄组幼兔兔瘟疫苗免疫剂量2、3、4后，其抗体产生速度较剂量1组快，剂量2、3、4组抗体效价一直显著高于剂量1组，剂量2、3、4组抗体效价峰值5.83显著高于剂量1组峰值3.25，有效抗体维持时间(>7周)大于剂量1组的2周。35日龄组幼兔剂量2、3、4组之间抗体产生速度、峰值、维持时间均无显著差异（表1）
2 x  l) I: e# o: ?! D* Z3 U+ I" N4 E表1  35日龄幼兔免疫不同剂量兔瘟疫苗后抗体效价的变化* c$ V3 c) e0 D9 N
Table 1. Diversification of the antibody of the 35 day-old rabbit immuned with different doses of vaccine5 h3 K7 e, Y9 N* R: C1 g
免疫
8 _5 ]/ A6 b) P% i, V" X/ Y/ U剂量        免疫前        免疫后/ O( {- t! j$ U7 @
                1周        2周        3周        4周        5周        6周        7周. W6 l' y5 ]/ Y. [" Q, J" E
0        2.50±0.41        1.25±0.95b        1.00±0.82c        0.75±0.96c        0.25±0.50d        0.25±0.50d        0.00±0.00d        0.00±0.00c# W. i1 J0 E2 p  I' }5 z
1        2.50±0.41        3.25±0.50a        3.00±0.82b        2.38±0.48b        2.00±0.00c        1.00±0.00c        0.75±0.50c        0.00±0.00c8 P/ ~% d4 D9 e. |. q  t
2        2.00±1.00        4.00±0.00a        4.66±0.58a        5.50±0.71a        5.67±0.58a        5.00±0.71b        4.50±0.73ab        4.50±0.53a4 H' {: U. t: S3 o6 T. j6 U* r) T
3        2.00±1.00        4.00±1.00a        4.33±0.58a        5.33±0.58a        5.00±0.00b        5.25±0.35ab        4.25±0.23b        4.00±0.34b
  V& l2 Y5 b" K. M! X8 z4        2.33±0.58        4.00±1.00a        4.33±0.58a        5.33±0.58a        5.83±0.29a        5.50±0.00a        4.75±0.56a        4.33±0.26ab
9 ^  E( y% Y  b6 W$ I. G7 Q注：同列数据标有不同字母者表示差异显著（P<0.05）。以下数据同。" V8 U9 o/ V% Z9 D5 J6 c$ H3 ^
Note: data with different superscripts withine a column show different significantly(p<0.05). The same as follows.7 S( a3 @) L0 ]9 a
/ D. f- i5 ]4 i+ o$ u
2.2 40日龄不同剂量组的抗体效价
" R) y! ~. Z5 T& V/ F. {40日龄组幼兔兔瘟疫苗免疫剂量2、3、4组后，其抗体产生速度较剂量1组快，免疫后第2周，各剂量组抗体效价均到达峰值，且各剂量组抗体效价峰值没有显著差异。免疫后第4周，剂量1组抗体效价显著下降，剂量2、3、4组抗体效价显著高于剂量1组抗体效价，剂量2、3、4组有效抗体维持时间大于剂量1组有效抗体维持时间（表2）) N5 f/ e4 }7 P+ x  f
表2  40日龄幼兔免疫不同剂量兔瘟疫苗后抗体效价的变化7 Z" K; t. |8 Y! Z, q) t, O) S
Table 2 .Diversification of the antibody of the 40 day-old rabbit immuned with different doses of vaccine
; Z9 O9 e, W! v1 A. z" j免疫剂量        免疫前        免疫后
+ @% G: b0 A% x% V& V6 L# I                1周        2周        3周        4周        5周        6周        7周, e+ X- x" g: A: W
0        1.25±0.58        1.00±0.82b        0.75±0.96b        0.25±0.50b        0.20±0.50c        0.00±0.00c        0.00±0.00c        0.00±0.00c
$ G5 ?) v7 ^2 x1        1.25±0.96        3.00±0.82a        5.75±1.71a        5.00±1.83a        2.75±0.96b        3.00±0.82b        2.13±0.50b        1.83±0.58b
$ o! T* B  R) B8 k8 ]5 J# r2        1.33±0.58        4.33±1.15a        5.83±0.29a        5.17±0.29a        5.33±0.58a        5.33±0.58a        5.00±0.00a        4.50±0.00a
9 {  p1 E- p& g7 e8 n6 n3        1.27±0.58        4.00±1.00a        5.50±0.50a        5.17±0.29a        5.00±1.00a        5.00±0.58a        5.00±0.29a        4.50±0.00a
/ ], w1 ~3 v, c1 T" D% k! K4        1.33±0.58        4.33±0.58a        5.83±0.29a        5.17±0.35a        5.33±0.58a        5.00±0.00a        5.00±0.35a        4.50±0.29a
; r: L( i4 ?% e' Y
. N; v: x" b0 \9 S  B- T- [, E2.3 45日龄不同剂量组的抗体效价
4 C4 r5 s/ X% w2 J% I4 X45日龄组幼兔兔瘟疫苗免疫剂量2、3、4组后，其抗体产生速度较剂量1组快，免疫后第2周，各剂量组抗体效价均到达峰值，且各剂量组抗体效价峰值没有显著差异。免疫后第4周，剂量1组抗体效价显著下降，免疫后第5周，2～4单位剂量剂量组抗体效价显著高于剂量1组抗体效价，2～4单位剂量剂量组有效抗体维持时间大于剂量1组有效抗体维持时间（表3）。
2 j8 j4 Z" [- M4 K8 E表3  45日龄幼兔免疫不同剂量兔瘟疫苗后抗体效价的变化* @" B. [% L, l/ a/ S( l; |* G2 Z
Table 3 .Diversification of the antibody of the 45 day-old rabbit immuned with different doses of vaccine
# u  U' N  [6 J+ Y. C免疫剂量        免疫前        免疫后0 v2 ], `0 Z% _* @
                1周        2周        3周        4周        5周        6周        7周
6 e5 j5 D# Y4 f* y8 \0        1.00±0.57ab        0.80±0.96b        0.35±0.50b        0.25±0.50c        0.00±0.00c        0.00±0.00c        0.00±0.00c        0.00±0.00c
; l# l; T: n& h: \- h% C0 ]8 \. T$ a3 y+ ^1        2.00±0.82a        3.25±1.26a        5.25±0.96a        5.50±1.29a        3.75±0.96b        3.25±1.26b        2.38±1.79b        2.00±1.41b
3 c* R4 l* b5 Z; ^8 `. u2        1.00±0.00ab        4.00±1.00a        5.17±0.58a        4.83±0.29b        5.16±0.76ab        5.50±0.45a        5.50±0.00a        4.75±0.59a
- A' L% k; _- n& `. A  h, F* y% D3        1.00±1.00ab        4.47±0.50a        5.25±1.06a        5.50±0.00a        5.75±0.35a        5.25±1.06a        5.00±0.50a        4.50±0.56a  k1 G  Z# N# P$ A2 U
4        0.33±0.58b        4.33±0.58a        5.50±0.00a        5.50±0.00a        5.25±0.35ab        5.25±0.35a        5.00±0.50a        4.50±0.36a9 H5 ~4 e% t% M& `. T
3 Z: c! h9 p6 l3 R
2.4 35、40、45日龄组免疫剂量1疫苗后的抗体效价
+ G7 X% E+ B; @! Q  Z: Q注射剂量1疫苗时，免疫后第1周，各日龄组之间抗体效价没有显著差异，免疫后2～3周，3个日龄组抗体效价均上升至峰值，40、45日龄组抗体效价均显著高于35日龄组，40、45日龄组之间抗体效价没有显著差异，35日龄组有效抗体维持时间为2周，40～45日龄有效抗体维持时间为4周（表4）3 M" X8 `8 i% |3 a0 s
表4  不同日龄幼兔免疫剂量1后抗体变化比较" `7 f4 d) S: @6 }( w
Table 4 The comparasion of the antibody of different days-old rabbits immuned with 1-unit dose of vaccine 9 X; D+ f$ k4 y# a4 B5 ^' O
免疫日龄        免疫前        免疫后6 x5 p6 `. L8 E* O3 t) ]
                1周        2周        3周        4周        5周        6周        7周
; {! S  a# I+ W# a+ W; T4 v4 T35日龄        2.50±0.41a        3.25±0.50        3.00±0.82b        2.38±0.48b        2.00±0.00b        1.00±0.00b        0.75±0.50b        0.00±0.00b5 g2 P0 N9 q9 @( L  q( t
40日龄        1.25±0.96b        3.00±0.82        5.75±1.71a        5.00±1.83a        2.75±0.96 ab        3.00±0.82a        2.13±0.50a        1.83±0.58a5 b6 a$ l: Y' d: r7 w
45日龄        2.00±0.82ab        3.25±1.26        5.25±0.96a        5.50±1.29a        3.75±0.96a        3.25±1.26a        2.38±1.79a        2.00±1.41a
& c8 x9 O+ `; d+ _5 z注：同列数据标有不同字母者表示差异显著（P<0.05）。以下数据同。* R: E4 p: i5 t7 t2 ?7 M
Note: data with different superscripts withine a column show different significantly(p<0.05). The same ac follows.
8 ~( C4 d0 b8 U0 w( W* }+ u' {$ e" n: j6 B1 K4 j  y" N# e
2.5 35、40、45日龄组免疫剂量2疫苗后的抗体效价5 M& l/ Y+ Q0 T, K- L2 |$ k% a' Y
注射剂量2兔出血症疫苗之后，各日龄组均在免疫后1周抗体效价升至保护性效价，各日龄组抗体效价峰值之间没有显著差异，40、45日龄组抗体效价峰值到达的时间为2周，35日龄组抗体效价峰值到达的时间为4周，各组有效抗体维持时间没有显著差异（表5）4 y6 ?0 r7 H9 d3 k
表5  不同日龄幼兔免疫剂量2后抗体变化比较
8 L. ?: Q3 V$ d, c  k$ cTable 5 The comparasion of the antibody of different days-old rabbits immuned with 2-unit dose of vaccine
  M% W% }2 Y8 o2 e- f免疫日龄        免疫前        免疫后
7 V$ x+ t; e( T. l8 e, p! x: z                1周        2周        3周        4周        5周        6周        7周
" g2 l! p# _5 f& g7 e# R4 C1 B! |35日龄        2.00±1.00        4.00±0.00        4.66±0.58b        5.50±0.71a        5.67±0.58a        5.00±0.71        4.50±0.73b        4.50±0.53
# m: E: K, h; N6 q% }! m5 G" Q& G40日龄        1.33±0.58        4.33±1.15        5.83±0.29a        5.17±0.29ab        5.33±0.58ab        5.33±0.00        5.00±0.00ab        4.50±0.00
0 b( I1 e8 r2 q: b3 g8 S% n45日龄        1.00±0.00        4.00±1.00        5.17±0.58ab        4.83±0.29b        5.16±0.76b        5.50±0.00        5.50±0.00a        4.75±0.59. |, |: L& ^# v" C

3 P3 I4 u  {! G# B. o+ e0 d2.6 35、40、45日龄组免疫剂量3、4疫苗后的抗体效价2 E* w* j2 K' {! W2 d
用剂量3、4注射兔出血症疫苗后，各日龄组均在免疫后1周抗体效价升至保护性效价，各日龄组抗体效价峰值之间没有显著差异，40、45日龄组抗体效价峰值到达的时间为2周，35日龄组抗体效价峰值到达的时间为4周，各组有效抗体维持时间没有显著差异（表6、7）。
: W1 @$ Q4 l5 K- ?7 }表6  不同日龄幼兔免疫剂量3后抗体变化比较
7 p# e6 s; M5 i3 VTable 6 The comparasion of the antibody of different days-old rabbits immuned with 3-unit dose of vaccine # `) t$ s5 s4 `- z! ?
免疫4 @0 }9 c$ b  _5 c% t) V  v  O1 T
日龄        免疫前        免疫后
0 `; y, M/ W1 s9 R8 R$ R                1周        2周        3周        4周        5周        6周        7周
8 F1 j( W+ ?9 w4 g35日龄        2.00±1.00        4.00±1.00        4.33±0.58        5.33±0.58        5.00±0.00        5.25±0.35        4.25±0.23b        4.00±0.34
; L. r! @* P1 c; x' o40日龄        0.67±0.58        4.00±1.00        5.50±0.50        5.17±0.29        5.00±1.00        5.00±0.00        5.00±0.29a        4.50±0.00
+ z4 b  |8 B  A( g1 h45日龄        1.00±1.00        4.47±0.50        5.25±1.06        5.50±0.00        5.75±0.35        5.25±1.06        5.00±0.50a        4.50±0.56
% D' }& J* W2 C8 T8 j% m# L: _' o  x
表7  不同日龄幼兔免疫4单位剂量后抗体变化比较
% d- A7 L$ A0 A, TTable 7 The comparasion of the antibody of different days-old rabbits immuned with 4-unit dose of vaccine % Z1 G' J' Y% \( g: W7 \9 Z- `
免疫3 R5 a% p0 k! o9 F0 B
日龄        免疫前        免疫后) L7 c! z1 H* z! Q4 S- F
                1周        2周        3周        4周        5周        6周        7周
, j: @% d* p, [" x9 Y35日龄        2.33±0.58a        4.00±1.00        4.33±0.58b        5.33±0.58        5.83±0.29        5.50±0.00        4.75±0.56        4.33±0.26
0 H4 f) u& o2 Y: L! i40日龄        1.33±0.58ab        4.33±0.58        5.83±0.29a        5.17±0.35        5.33±0.58        5.00±0.00        5.00±0.35        4.50±0.29+ ~1 e, D1 H: X% {+ M
45日龄        0.33±0.58b        4.33±0.58        5.50±0.29a        5.50±0.00        5.25±0.35        5.25±0.35        5.00±0.50        4.50±0.36
+ H5 o& w7 \) }" N  C5 y+ O4 i4 L
3 小结与讨论* u6 o8 [. e! U* B% V
3.1 相同日龄免疫剂量与抗体产生之间的关系
$ W# ]$ O; n, b" e$ x5 g' P35日龄的剂量2、3、4组的抗体峰值、有效抗体维持时间、抗体产生速度均显著大于剂量1组，但是剂量2、3、4组之间的抗体峰值、有效抗体维持时间没有显著差异，抗体产生速度与40、45日龄的剂量2、3、4组均为1周，抗体峰值的产生较40、45日龄的剂量2、3、4组仅慢1周。40日龄的剂量1、2、3、4组之间的抗体峰值无显著差异，剂量2、3、4组的抗体产生速度、有效抗体维持时间显著高于剂量1组。45日龄的剂量1、2、3、4组之间的抗体峰值无显著差异，剂量2、3、4组的抗体产生速度、有效抗体维持时间显著高于剂量1组。6 @  D3 _8 h7 c
3.2 同一剂量的不同免疫日龄与抗体产生之间的关系- @) r; x% C- j8 y$ A
免疫结果表明，不同日龄在免疫剂量1时，免疫日龄与血清抗体峰值和有效保护时间呈正相关。35日龄的抗体上升速度、有效抗体维持时间、抗体峰值均显著小于其它日龄组。免疫剂量2～4时，35日龄的抗体上升速度、有效抗体维持时间、抗体峰值与其它日龄组之间无显著差异。说明加大剂量之后，可以解决当前存在的免疫程序问题。$ u- B: e" a; X0 U
        目前，国内幼兔免疫机理方面的研究开展很少，人们对其免疫规律以及机理还不是十分清楚。本研究结果证明了兔出血症免疫程序中确实存在一些问题，同时提出了一些建议以供参考，并为进一步的深层次研究提供了实践依据。
$ @+ O6 h: ~! G" \! P; J$ X: `- K3 k1 ~" ]2 B* D2 Q! s8 N/ {
[ 本帖最后由 薛家宾 于 2008-1-31 16:25 编辑 ]
作者: 王高    时间: 2008-1-31 16:52
好
作者: qiuhuangang    时间: 2008-2-2 00:50
谢谢教授........
作者: 王高    时间: 2008-2-2 10:48
从薛老师得到的提示应该是35日龄的小日龄可以注射，加倍注射效果好。但是我们实际当中的商品肉兔都是28日龄断奶，到35日龄也隔了好几天了。我想问实际当中刚刚断奶时可否注射兔瘟疫苗？请薛老师看看行不行。
作者: 1985su    时间: 2008-2-2 14:04
兔瘟/波氏。魏氏苗的效果确实。大肠杆菌根本就多余，巴氏还有一定的用途
作者: 薛家宾    时间: 2008-2-3 08:45
标题: 回复 4楼 的帖子
建议再看一下另一篇文章-免疫日龄对兔病毒性出血症抗体水平和保护率的影响.# a5 S9 `3 l, U- w6 \# c) w
. H0 }/ j4 O" {6 t- }+ F
[ 本帖最后由 薛家宾 于 2008-2-3 08:46 编辑 ]
作者: 张连春    时间: 2008-2-3 20:45
:vic tory:



欢迎光临 东兔养兔论坛 (http://101.200.88.18/) Powered by Discuz! X3.2